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发布时间:2022-09-07 09:39:00 作者:创新通恒
反相色谱分离纯化后,怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质?
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除,国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤,其中,离子交换层析效果比较好,还可以起到浓缩样品的作用。
首先,冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***,药品实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量,只要不超过允许范围,这种办法是很简单、有效的。
其次,如果你的药品的分装量不大的话(<100ug),建议你用离子交换层析,尽量装一个小一点儿的柱子,让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上,稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛,考虑稀释,尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话,可能会形成TFA盐,这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗,然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸,再干燥后形成盐酸盐。
制备色谱柱如何测柱效?
可以选择几种物质,苯,萘、蒽等的衍生物上柱,流动相一般用65-80%的***/水,测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大,很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效,然后定期检测柱效进行以进行比较。
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工业制备色谱
产品纯度:目标产物有效成分的含量
纯度要求由其纯化目的来决定。一般情况下,微量的天然产物只需富集到70%就可进行初步鉴定;而在多步反应中,有些中间产物的纯度在80%左右即可满足要求;供核磁及红外测试的样品纯度需达到95%;而做定性和定量分析的标准样品含量则要求至少在99%以上。纯度是制备纯化工艺中关键标准,通常制备纯化工艺中的分离与收集过程决定终样品的纯度。
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