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液相色谱分析的流程

由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。

遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在较佳条件下得以分离。

液相色谱的发展变化介绍

   液相色谱色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。    液相色谱的发展，涉及键合相，基于被测物质在固定相（含液体）和流动相之间的相对溶解度的差异，通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。将固定液机械地涂渍在担体上组成固定相。化学键合固定相。这种固定相是通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶（载体）表面的游离羟基上，代替机械涂渍的液体固定相。这不仅避免了液体固定相流失的困扰，还大大改善了固定相的功能，提高了分离的选择性，化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。

液相色谱法的常见问题

样品准备是成功的关键；在将所有样品加载到自动进样器中之前，必须对所有样品进行过滤，这一点非常重要。当使用UHPLC时，如果不过滤样品，使用亚2微米颗粒的色谱柱进行***分离时很容易发生阻塞，这一点就尤为重要。对于流动相也是如此，尤其是在使用缓冲区的情况下。

对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要，溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂，则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强，可能会观察到类似的问题。