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发布时间:2022-07-30 06:21:00 作者:创新通恒
什么是制备性液相色谱
液相色谱是一种分析方法,制备色谱是一种分离纯化手段。液相色谱把普通的色谱柱换成制备柱,就是制备液相色谱,两者的区别在于一种以分析为目的,追求的是检测精度,样品承载量非常小;制备色谱以分离纯化为目的,它追求的是样品承载量,检测精度很低,检测只用作鉴别即可。
另外,制备色谱不仅可以用液相,还可以用气相色谱、薄层色谱、层析柱等多种载体,目前主流的制备色谱是高速逆流色谱
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液相色谱和气相色谱相比较,在以下几个方面具有***性
(1)气相色谱不适用于不挥发物质和对热不稳定物质,而液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制。有些样品因为难以汽化而不能通过柱子,热不稳定的物质受热会发生分解,也不适用于气相色谱法。这使气相色谱法的使用范围受到了限制。据统计,目前气相色谱法所能分析的有机物,只占全部有机物的15%~20%。另一方面,液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制。所以液相色谱非常适合于分离生物、医学有关的大分子和离子型化合物,不稳定的天然产物,种类繁多的其它高分子及不稳定的化合物。
(2)对于很难分离的样品,用液相色谱常比用气相色谱容易完成分离
(3)和气相色谱相比,液相色谱对样品的回收比较容易,而且是定量的,样品的各个组分很容易被分离出来。因此,在很多场合,液相色谱不仅作为一种分析方法,而且可以作为一种分离手段,用以提纯和制备具有中等纯度的单一物质。在气相色谱中所分离出的各样品组分虽也可以回收,但一般都不太方便,而且定量性差。液相色谱法由于具有这些气相色谱法不具备的优点,因此在许多领域得到广泛的应用。
液相色谱法的常见问题
样品准备是成功的关键;在将所有样品加载到自动进样器中之前,必须对所有样品进行过滤,这一点非常重要。当使用UHPLC时,如果不过滤样品,使用亚2微米颗粒的色谱柱进行***分离时很容易发生阻塞,这一点就尤为重要。对于流动相也是如此,尤其是在使用缓冲区的情况下。
对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要,溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂,则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强,可能会观察到类似的问题。
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