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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱进行制备有什么优点

以液相色谱进行制备时，分离条件温和，分离检测中 不会导致试样被破坏，且易于回收原物。

液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。

根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。

液相色谱仪的工作原理是什么?

利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。

使用液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，以后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。

那么如何选择液相色谱仪？通过哪些指标来选择呢？

下面给大家介绍几条选择液相色谱仪的方法仅供大家参考。液相色谱仪有输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器、柱温箱等。判断液相色谱仪的指标有噪音，漂移，很小检测浓度，定性定量重复性等。

1、液相色谱仪噪音是指由液相色谱仪的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他液相色谱仪非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到液相色谱仪检测器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。

2、液相色谱仪检测器很小检测浓度(很小检测限)是反映液相色谱仪检测器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL：液相色谱仪很小检测浓度Nd:噪音C：液相色谱仪样品浓度很小检测浓度H：样品峰高)。

3、液相色谱仪检测器漂移是指仪器稳定后一段时间内基线漂离液相色谱仪基线原点的距离，通常用来衡量液相色谱仪稳定快慢。高的品质的液相色谱仪能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了液相色谱仪分析效率。

4、液相色谱仪定性定量重复性定性定量重复性主要是考核液相色谱仪稳定性的指标，这对于分析液相色谱仪样品来说是非常重要的。好的液相色谱仪其稳定性应该是十分好的，这就要求多次液相色谱仪进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的液相色谱仪检测结果才能使人信服。