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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

保养液相色谱的重要性

　国产的液相色谱仪在工作了一天之后，都需要停机一夜等到第二天才可以继续工作，可按照以下的步骤停机。关闭二次仪表;关闭检测器电源，同时切断柱箱温度的检测器电源;停止恒流泵之后切断它的电源;用二次蒸馏水冲洗进样阀的进样孔;切断工作室的电源，加满盛液瓶中的流动相，等到第二天的使用。给色谱仪盖上防尘罩。色谱仪器是需要好几周或者好几个月的暂不使用，除了按照短期停机的步骤之外，还应该拆除替代柱的导管，拔下总电源接线板的插头，贮存好专门用的流动相和样品，擦干净仪器，盖上防尘罩，存放位置需干燥。

液相色谱仪的工作原理是什么?

利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。

使用液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，以后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。

液相色谱法

色谱法的创始人是俄国的植物学家茨维特（ M.Tswett）。1906年，俄国植物学家茨维特发表了他的实验结果：为了分离植物色素，他将含有植物色素的石油的醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油的醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，从而形成一圈圈不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色谱法(chromatography)。