***液相色谱方法免费咨询「创新通恒」

UPLC和HPLC的区别

与传统的***液相色谱(HPLC)相比，UPLC具有高分离度(ultra resolution)、高速度(ultra speed)、高灵敏度(sensitivity)等优势。在全方面提升HPLC的速度、灵敏度和分离度诸品质的同时，保留其原有的实用性及原理。

其显著的优势是可以缩短分析时间，提高工作效率。

使用UPLC确实能明显缩短分析时间，提高了效率（如某有关物质分析方法，使用HPLC运行一针是75分钟，UPLC完全可以在10分钟内搞定），分析效率提高将近7.5倍。

当然了，分析效率提高这么多，其配套设备肯定也不是闹着玩的。UPLC需要小颗粒杂化填料（1.7um）的色谱柱、更高耐压（达15000Psi）、低系统体积的输液单元。

***液相色谱法概述

***液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项***、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

HPLC概述

液相色谱系统由泵及流路系统、进样系统、色谱柱系统以及检测器系统构成，其中进样系统可细分为手动进样与自动进样，两种进样方式均要求进样的准确性与精密度。其中手动进样系统由于人为因素对进样的准确性有很多大的影响，如人员的手动进样熟练程度等，渐渐退出市场。而自动进样系统，由于具有很高的准确度以及精密度，几乎排除人员因素的影响以及具有高通量、自动运行序列等特点而成为HPLC系统的标配。

液相色谱进样系统位于泵后，色谱柱之前的高压区域，如下图所示。流动相混合之后流经进样系统，将样品溶液带入到色谱柱内，完成进样。

关于色谱柱的使用和维护

色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

调节流速太快。。。

避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。

反冲色谱柱。。。

一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

预柱和保护柱。。。

选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。