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发布时间:2022-06-11 01:38:00 作者:创新通恒
色谱分离基本原理
在色谱法中存在两相,一相是固定不动的,我们把它叫做固定相;另一相则不断流过固定相,我们把它叫做流动相。 液相色谱的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡,液相色谱使得各组分被固定相保留的时间不同,从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检测。
液相色谱仪的使用特点进行分析概要
液相色谱仪是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术中,流动相改为高压输送,色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱;同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。 液相色谱仪特点:
1、高压:液相色谱法以液体为流动相,液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般可达150~350×105Pa;
2、高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于1h;
3、效率很高:近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高;
4、高灵敏度:液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外,用样量小,一般几个微升;
5、适应范围宽
液相色谱仪在食品检测中的应用
实际的食品安全检测中,液相色谱仪更加适应对沸点高、热稳定性较差、分子量较高物体的测试。
1、N-亚的测定
在腊肉等腌制食品中,生产主体经常会添加或者亚作为腌制食品的发色剂,本身并不存在严重的危害,但是如果其添加的量过大,在还原作用的影响下肉制品中会生成N-亚,而N-亚对人体的危害较大,长期摄入会导致和结等疾病。针对N-亚的传统测量方法是气相色谱法,这种方法只能对被测物体中挥发性的N-亚进行测量,测量的精度不高,而且测量过程中仅色谱测定这一环节就需要一个多小时的时间,而采用液相色谱仪全过程只需要13分钟。
2、多环烃和杂环芳烃的测定
油炸、烧烤肉制品的制作过程中常常会产生多环烃和杂环芳烃等污染物,这种污染物中包含的3,4-苯并芘、二苯并芘是典型的致癌物,使用传统的氧化铝层析柱对其含量进行测量起码需要10个小时的时间,而使用液相色谱仪整个测量过程只需要数十分钟。
3、芳香胺的测定
芳香胺是人工合成色素的主要原料,长时间大量摄入会导致对人体的代谢系统的强烈,容易诱发等疾病,由于芳香胺的添加本身是不合法的,所以对芳香胺的检测工作比较重要。通常情况下液相色谱仪测定工作会在5分钟内完成,而传统的TLC测定法则需要50分钟的时间才能完成。
液相色谱的前世今生
早在古代罗马时期,人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上,通过观察溶液展开产生的同心圆环来分析染料与色素。实际上,这种简单操作已经采用了现代色谱学的基本原理。
19世纪中叶,德国化学家Runge对古罗马人的这种方法作了重要的改进,使其具有良好的重现性与定量能力,使盐溶液可在纸上分离;另外,化学家Goppalsr-oeder也在长条纸上分离了染料和动植物色素,这些研究标志着纸色谱法的建立,并逐步发展成为现代色谱技术。
1903年,俄国植物学家Tswett在华沙自然科学学会生物学会会议上发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”中,提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法,这一工作标志着现代色谱学的开始。他将碳酸钙装入竖直的玻璃柱中,从顶端倒入植物色素的石油的醚浸取液,进一步采用溶剂冲洗,使溶质在柱的不同部位形成色带,首先向人们公开展示了采用色谱法提纯的植物色素溶液以及色谱图显示着彩色环带的柱管。Tswett将这种方法命名为色谱,管内填充物被称之为固定相,冲洗剂被称之为流动相。
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