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发布时间:2022-06-09 23:39:00 作者:创新通恒
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC?
(1)了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质,通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。
(2)样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂以助溶。
(3)不是一定要用流动相来溶解样品,对溶解度差的样品,可以选择***,THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO,对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留,不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱,一般不会影响峰型。
(4)可以固体上样。
制备色谱的填充
填料是工业制备色谱的血脉,填料的选择和利用是非常关键的,目前已有越来越多的产品应用到IPC中。填料的化学性质和物理性质决定了色谱的分离性能和动力学性能。应用于大规模工业化制备色谱中的填料具有如下特殊的要求。
1、机械强度高:填料需要承受很大的机械压力,因为填料在IPC使用中,需要经常装卸,机械性能差的填料经受不住反复填充,它们易破碎,产生细颗粒,降低柱渗透性,甚至堵塞滤片,造成流速分布不均匀,影响分离产物的纯度,在系统中产生极高的柱压而无法继续使用引。
2、负载量大:在IPC中,填料的负载量越大,则单位体质量填料可处理的原料量就可增加,因而提高了产率。选择合适孔径及孔径分布的填料是获得高负载量的一个关键因素。
3、可大量供应,批间的重现性好:制备色谱工艺过程要扩大,必须有可靠的供货源提供大量填料,否则无法实现工业化。填料各批量之间的化学和机械稳定性、孔结构及可重复的比表面积等必须具有高度的重现性,否则难以保证长期、持续、稳定的分离与纯化生产工艺。
4、合适的颗粒大小和窄的粒度分布范围:细颗粒可增加塔板数及分辨率,但同时引起装柱困难,需要更高的操作压力。
工业制备色谱
现代生物技术的迅速发展及其产业化对其下游过程,即生物技术产品(尤其是各种蛋白质)的分离纯化技术提出了迫切的需求。通过发酵和动、植物细胞培养等生成的目标产物需通过一系列的分离和纯化等步骤才能获得终的产品。通常,生物技术产品生产中分离提纯成本要占其生产总成本的40%~90%。在以小分子产品为主的传统发酵工业中分离成本要占总成本的60%左右,而以蛋白质为代表的现代基因工程产品则有时可高达90%左右。作为生物工程的一个组成部分,分离技术在其产品实现中起到重要作用。
产品纯化收率:纯化得到的目标物与初始样品中目标物的比值
合成反应中的收率主要由反应的复杂程度即得到目标产物的难易程度来决定,若想得到佳的产品收率,必须首先得到目标物的佳反应条件,筛选条件的过程需要很高的理论水平以及很长时间的实验研究。得到佳反应条件后,再以合适的分离纯化手段才可能得到佳纯化效果,即色谱制备纯化的收率主要取决于实际分离的效果。
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