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你对制备色谱陌生吗？还不进来看看它的特点

很多初接触色谱领域的朋友对制备色谱这个名词比较陌生。其实，在化学化工医学等广泛采用的层析法以及薄层色谱就是较为典型的制备色谱，换句话说，将分析色谱的进样量增大，同时得出大量的所需物质（馏分）的过程就可以称为制备色谱。分析色谱的目的，是分析出混合物中一个（或者几个）纯物质的含量。制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。而制备色谱系统则是利用制备色谱的思想能得到纯化物质的多个分析测试设备联用的总称。     分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上，由此，我们需要考虑调整上样量，流速，梯度：     

1.上样量的调整：     他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关：     

具体关系时；制备柱上样量/分析柱上样量=制备柱长/分析柱长*制备柱内径的平方/分析柱内径的平方；     

2.流速的调整：     

制备柱流速/分析柱流速=制备柱体积/分析柱体积=制备柱长/分析柱长制备柱内径的平方/分析柱内径的平方；     

3.梯度的调整：     

制备柱梯度/分析柱梯度=制备柱体积/分析柱体积*制备柱流速/分析柱流速；

液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱仪分类

      液相色谱仪依据样品在固定相和流动相分离过程的物理化学原理，可分为以下五种。

　　1、吸附色谱：

　　用固体吸附剂作固定相，以不同极性溶剂作流动相，依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。

　　2、分配色谱：

　　用载带在固相基体上的固定液作固定相，以不同极性溶质作流动相，依据样品中各组分在固定液上分配性能的差别来实现分离。根据固定相和液体流动相相对极性的差别，又可分为正相分配色谱和反相分配色谱。当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱;若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱。

3、离子色谱：

　　用微粒离子交换剂作固定相，以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相，依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离。

　　4、体积排阻色谱：

　　用化学惰性的多孔性凝胶作固定相，按固定相对样品中各组分分子体积排阻滞作用的差别来实现分离。以水溶液作流动相的体积排阻色谱柱，称为凝胶过滤色谱;以有作流动相的体积排阻色谱法，称为凝胶渗透色谱法。

　　5、亲和色谱：

　　以在不同基体上，键合多种不同特性的配位体作固定相，用具有不同pH值的缓冲溶液作流动相，依据生物分子与基体上键联的配位体之间存在特异性亲和作用能力的差别，而实现对具有生物活性的生物分子的分离。