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发布时间:2022-04-20 08:39:00 作者:创新通恒
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC?
(1)了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质,通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。
(2)样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂以助溶。
(3)不是一定要用流动相来溶解样品,对溶解度差的样品,可以选择***,THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO,对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留,不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱,一般不会影响峰型。
(4)可以固体上样。
同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套,分离度会不会变化?
一般会有一定的变化,原因有以下几点:
(1)制备柱的装填是否均匀,如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样,停留时间不同,色谱峰可能变宽。
(2)如果样品在流动相中溶解度小,在制备色谱上会有不同的峰展宽。
(3)如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象,放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重,导致分离失败。
工业制备色谱
蛋白质是具有一定构象(空间结构)的生物大分子:其一级结构是形成肽链的氨基酸序列(数目、种类、顺序),是蛋白质结构的基础;在一级结构水平上,部分肽链发生卷曲和折叠,形成其二级结构,这种卷曲和折叠是靠肽链中的羰基与氨基之间的氢键维持的:在二级结构的基础上,多肽链再盘绕和折叠,形成三维空间形态,即为蛋白质的三级结构:而蛋白质的四级结构是指同一蛋白质中各条肽链之间的相互关系。
分析物的性质
在HPLC上分析的样品通常不耐热,并且在较高温度下会降解,而在GC中,溶质可承受高达400℃的温度,并且具有挥发性。用于HPLC分析的样品通常是液体或溶解在液体中的固体。除液体和溶解的固体外,GC还可以处理气体。GC样品的分子量较低,而HPLC可用于分析涵盖从高分子量聚合物到大型生物分子的一系列样品的高分子量化合物。
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